層析色譜柱是一種用于分離和純化化合物的色譜技術(shù)。它通常由一根固定相色譜柱和一個(gè)可移動(dòng)的流動(dòng)相色譜柱組成。在層析色譜柱中，固定相色譜柱通常由一系列不同直徑的顆粒組成，這些顆粒具有不同的分子量和孔隙率。流動(dòng)相色譜柱則通常由一系列具有不同極性和流速的溶劑組成，這些溶劑可以沖洗固定相色譜柱，并將不同的化合物從固定相色譜柱中分離出來。
 

　　化合物的吸附和解吸過程是基于范德華力和氫鍵作用?；衔锓肿釉诠潭ㄏ嗌V柱上的吸附是由于分子表面上的各種化學(xué)和物理性質(zhì)的差異，這些差異導(dǎo)致了分子在固定相色譜柱上的吸附能力不同。吸附作用可以導(dǎo)致化合物的電性、氫鍵和疏水性等性質(zhì)發(fā)生變化。而化合物在流動(dòng)相溶劑中的溶解度則取決于其分子量和化學(xué)結(jié)構(gòu)等因素。
 

　　流動(dòng)相溶劑可以通過沖洗固定相色譜柱來將化合物從固定相色譜柱中分離出來。這個(gè)過程類似于吸附色譜柱中的吸附過程，只是在這種情況下，分離過程是基于溶質(zhì)在固定相色譜柱上的吸附強(qiáng)度差異。流動(dòng)相溶劑的沖洗速度和流速可以調(diào)節(jié)，以便在不同的化合物之間實(shí)現(xiàn)分離效果。

 

　　層析色譜柱采用層析法，是一種以分配平衡為機(jī)理的分配方法。薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，待干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上，晾干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時(shí)，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。
 

　　層析色譜柱操作的幾大要點(diǎn)須知：
 

　　1.在濾紙條上端邊緣約1厘米的中央剪一小孔。
 

　　2.將濾紙條平放于潔凈的紙上，在距離濾紙下端1cm處用鉛筆輕畫一橫線，并在橫線的中央畫一直徑為2mm的小圓圈。
 

　　3.用毛細(xì)管吸取氨基酸混合液，在濾紙條下端的小圓圈內(nèi)點(diǎn)樣。
 

　　4.取干燥大試管，加入被水飽和的酚溶液10ml，注意勿使溶液沾到試管壁上，將試管垂直固定。
 

　　5.在距濾紙條下端0.5cm處穿大頭針。從濾紙條上端小孔處穿棉線并左右分開，調(diào)節(jié)線的高度使濾紙垂直懸于試管內(nèi)且下湍浸入溶液0.5cm，注意勿使點(diǎn)樣點(diǎn)浸入溶液中，亦勿使濾紙條接觸試管壁。
 

　　6.此時(shí)即可看到溶劑向上移動(dòng)，溶劑升到一定高度時(shí)，小心將紙條取出，以鉛筆標(biāo)出溶劑上升的前沿。
 

　　7.將濾紙條兩端，用大頭針釘在小木框上，吹干后用噴霧器均勻地噴一層0.2%三酮乙醇溶液，然后再將濾紙條吹干，即可看到紙上顯出三色點(diǎn)，每個(gè)色點(diǎn)代表一種氨基酸。
 

　　8.分別測量并計(jì)算三種氨基酸的Rr，再根據(jù)教師供給的值確定此三個(gè)色點(diǎn)各為何種氨基酸。
 

　　9.留在試管內(nèi)的酚溶劑切勿棄去，塞緊塞子。